生物体内常见的生物大分子有:多糖、蛋白质、核酸(DNA和RNA)
真核细胞内DNA主要分布在细胞核内的染色质上(DNA与蛋白质结合在一起)
提取生物大分子的基本思路:用一定的物理或者化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子
DNA溶解
蛋白质析出
部分发生盐析沉淀
溶解
选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,使杂质沉淀;或者相反以达到分离的目的
蛋白酶-水解蛋白质,对DNA无影响;嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶,其作用是分解蛋白质,使提取出的DNA纯度较高
高温-大多数蛋白质不能忍受60-80度的高温而变形,而DNA在80度以上才变形
洗涤剂-瓦解细胞膜,但对DNA无影响(破坏细胞膜中的蛋白质分子,有利于植物细胞中DNA释放)
在沸水浴条件下,DNA与二苯胺试剂反应,出现蓝色
紫外灯照射法
电泳指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
根据相对分子质量的大小分离蛋白质(利用某些凝胶对大小不同的分子的阻滞作用不同而将不同的分子分离开来)
相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢
相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,速度较快
在一定范围内,缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变
一般分为四步:样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定血红蛋白的提取和分离
红细胞的洗涤(低速短时间离心,减少白细胞的干扰;生理盐水重复洗涤至上清液不再呈现黄色,表明洗涤干净)
血红蛋白的释放(加入40%体积的甲苯,破坏细胞膜,释放出血红蛋白)
分离血红蛋白溶液(分为四层有机溶剂、酯类物质、血红蛋白溶液、红细胞破碎物沉淀)
透析
在一定范围内,缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变
高二生物选修一