混合组分随流动相经过固定相时,会与固定相发生相互作用。由于结构和性质的不同,各组分与固定相作用的类型,强度也不同,在固定相上滞留的程度叶不同,即被流动相携带向前移动的速度不等,产生差速迁移,从而实现混合组分的分离。
1.色谱过程是组分分子在流动相和固定相间多次“分配”的过程
2.吸附柱色谱法的色谱过程:把含有A , B两组分的混合物加到色谱柱的顶端,A , B均被吸附到吸附剂(固定相)上
3.然后用适当的流动相洗脱,当流动相流过时,已被吸附在固定相上的两种组分又溶解于流动相中而被解吸,并随着流动相向前移行,已解吸的组分遇到新的吸附剂,又再次被吸附。如此,在色谱柱上发生反复多次的吸附-解吸(或称分配)的过程
4.若两种组分的结构或理化性质存在着微小的差异,则它们在吸附剂表面的吸附能力和在流动相中的溶解度也存在微小的差异,吸附力较弱的组分,随流动相移动较快
5.经过反复多次的重复,使微小的1差异积累起来,其结果就使吸附能力较弱的A先从色谱柱中流出,吸附能力较强的B后流出色谱柱,从而使两组得到分离。
保留比:组分的迁移速度与流动相迁移速度之比
子主题2
色谱条件一定时,K大的组分保留时间长,流出晚
利用样品中不同组分在固定相或流动相中的溶解差别,即分配系数的差别而实现分离
气-液 , 液-液
洗脱顺序:正相液-液中,极性弱的先被洗脱,极性强的后;反相相反
利用样品中不同组分对固定相吧面活性吸附中心的吸附能力差别,即吸附系数的差别而实现分离
气-固 液-固
溶剂强度越大,吸附能力越强,洗脱能力越强
利用样品组分离子对离子交换剂的亲和能力的差别,即选择性系数的差别而实现分离
价态低的离子选择性系数小,先被洗脱
酸性阳离子交换剂中,同价阳离子的水合离子半径越大,选择性系数越小,越先洗脱
流动相离子强度增加,洗脱能力增加
根据被分离组分分子的线团尺寸不同,即渗透系数不同而进行分离
又称空间排阻色谱法,凝胶色谱法
只取决于凝胶的孔径大小与被分离组分分子的线团尺寸之间的关系
相对分子质量越大,渗透系数越小,越先被洗脱
1.基线:仅流动相通过检测器时得到的流出曲线。平行于坐标轴的直线
2.色谱峰:突起的部分
3.峰高h:色谱峰顶点与基线的垂直距离
衡量组分被洗脱出色谱柱的分散程度,值越大,越分散
为0.607倍峰高处的峰宽之半
5.半峰宽:峰高一半处的峰宽。 W1/2=2.355σ
6.峰宽W:两侧拐点切线在基线上截得的距离,又称基线宽度。W=4σ或W=1.699W1/2
7.峰面积A:色谱曲线与基线间的面积。A=1.065hW1/2
基本原理
子主题1
从进样开始到某组分的色谱峰顶点的时间间隔
不被固定相保留的组分从进样出现最大浓度的时间
组分在固定相中滞留的时间tR’=tR-t0
VR=tR*Fc
是色谱柱中从进样器至色谱柱间导管的容积,固定相的孔隙及颗粒间隙,柱出口导管及检测器内腔容积的总和V0=t0*Fc
VR’=VR-V0=tR’*Fc
子主题3